CAR-T细胞的质量控制：安全、有效与稳定性的保证
序
前言
随着越来越多CAR-T细胞产品的研究性新药申请(INDAs)和新药上市申请(NDAs)，解决CAR-T细胞产品的质量控制、有效性和安全性研究以及相关监管问题已变得愈发重要与紧迫。尽管存在关于细胞疗法和基因疗法产品的技术指南，但其中对CAR-T细胞产品的技术要求和规格缺乏具体描述。
由于每个制造商在CAR设计、基因导入、细胞培养以及细胞纯化技术方面存在差异，因此CAR-T细胞的质量控制应考虑特定的生产过程和产品特性。此外，CAR-T细胞的生产过程应遵循当前良好生产规范(cGMP)的要求。cGMP旨在提供一个框架，以确保训练有素且经过定期培训的人员在受良好控制的设施和设备中进行高质量的生产，同时需配备广泛的系统来记录操作的方方面面，以证明持续合规性。
针对CAR-T细胞产品的质量控制，应基于相关指南并全面考虑产品作为生物产品、细胞产品和基因疗法产品的特性，包括针对质量、安全性和有效性的全面测试。另外，CAR-T细胞的制备过程十分复杂，需要进行全过程质量控制。此外，生产过程验证和稳定性研究对于CAR-T细胞产品来说也至关重要。
一
关于生产材料控制
CAR-T细胞的生产材料涉及制备细胞治疗产品所需的物质或材料，包括细胞、基因修饰载体、培养基、细胞因子、各种添加剂成分、冻存液、辅料等。这些材料与产品的质量密切相关，因此研究人员应对生产材料建立良好且标准化的质量管理体系，包括对其使用进行风险评估、供应商审核和质量检测。
如果T细胞是由异体供体提供的，那么供体细胞的来源应符合国家相关的法律法规和道德规范要求。为确保供体细胞的可靠性，采集、运输、分类、测试和保存程序应进行充分研究和验证。在此基础上，针对供体细胞的特性、培养条件、生成、生长特性、保存状态、保存条件和质量检测等方面应制定明确的规格和要求。
原则上，如果条件允许，应建立细胞库以保存和生产供体细胞。细胞库的层级应根据细胞的特征、生产条件和临床应用的需求进行充分考虑。细胞库应建立明确的测试标准，并满足安全性、质量可控性和/或功效的基本要求。
在生产过程中，使用的细胞应满足以下基本要求：清晰的来源和培养历史、可控的安全风险、生产过程中足够的质量以及管理良好的细胞库。
目前，CAR-T细胞生产中的基因修饰主要通过病毒载体(逆转录病毒载体或慢病毒载体)、转座子系统或直接的mRNA电穿孔来实现，从而使CARs在T细胞表面表达。这些细胞能够特异性识别并结合肿瘤细胞表面的抗原，最终杀死肿瘤细胞。
在生产CAR-T细胞时，每种使用的物质(例如培养基、血清、细胞因子、酶、抗体、抗生素和磁珠等)都应明确定义并评估其适用性。为了证明质量，应测试这些物质的特性，包括纯度、细菌内毒素、无菌性、不定因子以及生物活性等。
如果使用商业化的培养基，应确保供应商具备相应的资质，并需提供有关成分信息及相应的质量证明。
在T细胞培养中，应尽量避免使用人或动物来源的血清，并禁止使用同种异体的人血清或血浆(特殊情况除外)。若不可避免地要使用动物血清，需确保其不含有特定的动物病毒污染，并禁止使用来自海绵状脑病流行地区的牛血清。
若培养基中包含人血来源的成分，如白蛋白、转铁蛋白和各种细胞因子等，需了解这些成分的来源、批号及质量认证情况，并使用经监管机构批准用于临床的产品。细胞治疗产品中的成分应符合药物赋形剂的相关要求。在选择成分时，应优先考虑那些已获准用于人体的成分;若选用未经验证或未经批准的成分，必须进行全面的研究和评估。
二
关于过程中的控制和测试
在生产CAR-T细胞的过程中，需要进行过程中的控制和测试。过程控制包括监控生产过程，确保其符合预定的目标。研究人员应该根据对整个过程和生产经验的充分了解，明确关键的生产步骤，并定义对这些步骤中敏感参数的限制，以避免过程偏差。过程中的测试可以用来监测制备过程中细胞的质量，包括在关键步骤或中间产品级别上测试产品的关键质量属性。通过建立过程中的测试方法和验收标准，并结合最终产品的发布测试，可以对CAR-T细胞的整个过程和产品质量进行控制，从而确保生产过程的可重复性并最终实现产品批次间的一致性。
三
关于放行测试
在CAR-T细胞产品发布之前，进行适当的测试以确保其符合指定的发布标准是至关重要的。这些测试应基于产品的特性、纯度、安全性和有效性进行，并应通过多种方法进行验证。只有当产品通过充分的测试并获得合格认证后，才能进行发布。测试方法应经过充分的研究和验证，特别是对于新方法而言，综合验证是必要的。
对于药典中包含的方法，需要进行适用性验证。
重要的是，必须通过合理的过程中测试和更广泛的过程验证来适当补充由于简化发布测试程序而缺少的信息。这份证书应该作为产品质量的重要参考依据，并应该提供给所有相关方。
CAR-T细胞的质量控制测试项目应该基于对产品品质的深入研究，同时充分理解生产过程和临床适应症，并考虑到产品的特性和当前的科学理解与共识。随着从临床前阶段到临床阶段的研究不断深入，可以逐步积累与生产过程相关的信息，并逐步改进测试方法以满足临床开发各阶段的质量控制需求。对于用于验证性临床试验的样品，建议其质量控制要求应与市售产品一致。
通常情况下，质量控制项目应包括：
1、产品标识：应明确产品的来源、生产批次、生产日期等信息，以便于追踪和管理。
2、生物学功效：这是指CAR-T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用，是衡量产品质量的重要指标。
3、纯度：指CAR-T细胞中不含其他杂质的程度，如未修饰的T细胞或其他非目标细胞。
4、杂质：包括细胞培养中的支原体、内毒素等可能对人体产生不良影响的物质。
5、细胞数：即活细胞数、功能细胞数等，是保证CAR-T细胞治疗效果的关键因素。
6、常规检测：如无菌、支原体、内毒素等常规检测项目，以确保产品的安全性。
在建立验收标准时，应基于临床前研究、临床研究和验证试验中所有批次的测试数据以及其他相关数据，如稳定性研究、文献报告和生产经验等。这些数据应该能够证明产品的安全性和有效性，并能够满足临床需求。
四
关于生产过程验证
在CAR-T细胞产品制备的整个过程中，需要对多个连续批次(至少三个批次)的生产进行全面的过程表征和过程验证。这些批次的生产数据应作为确定过程参数和质量标准的基础，以确保对每个过程的有效控制。在过程验证批次中，应比常规批次更广泛地测试、分析和标识中间产品和成品，从而为建立过程项目中的测试项目和质量标准以及常规批次的发布测试提供基础。
对于CAR-T细胞产品的生产过程，需要进行多个方面的测试，以确保产品质量。这些测试项目通常包括生物学功效、纯度、安全性、有效性等方面的检测。此外，还需要对生产过程中的各项参数进行控制，如细胞培养条件、基因修饰、细胞筛选等。这些参数的波动可能会对产品质量产生影响，因此需要进行严格的控制和检测。
在建立产品质量标准时，应考虑到产品的特性、安全性、有效性等方面。这些标准应基于当前的科学理解和共识，并考虑到产品的临床适应症和生产过程。随着该领域研究的不断深入，可以逐步改进和优化这些标准，以满足临床开发各个阶段的质量控制要求。
五
关于稳定性研究
在CAR-T细胞产品的生产和使用过程中，冷链运输和储存的严格控制对于确保产品质量和防止细菌、支原体等污染的发生起着至关重要的作用。冷链物流是指为了确保产品在生产、加工、储存、运输和配送等各个环节始终处于一定的低温环境中，以确保产品质量和安全性。
在CAR-T细胞产品的生产过程中，许多因素可能影响产品质量，如温度、湿度、压力、光照等。其中，温度是最重要的因素之一，因为过高或过低的温度都可能对细胞活性产生负面影响。因此，在生产过程中需要使用专业的冷藏设备和严格的冷链管理，以确保产品质量。
此外，在CAR-T细胞产品的储存和运输过程中，也需要进行稳定性研究，以验证其保存条件和保存期限。稳定性研究是指在特定的储存条件下，对产品进行长期的观察和检测，以了解产品在不同时间点的稳定性和变化情况。对于需要暂时保存的样品，需要进行稳定性研究以确定其保存条件和保存期限。
在进行稳定性研究时，应根据产品特性、临床使用需要以及储存、包装和运输的特定条件来设计合理的研究方法。例如，对于冷冻细胞产品，需要进行冷冻和解冻研究，以了解细胞在冷冻和解冻过程中的变化情况。此外，还需要对产品的细胞特性、生物学效能、细胞纯度、活细胞数量和比例、细胞计数以及与安全性相关的测试等方面进行全面的检测和分析，以确保产品质量和安全性。
E.N.D
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